加味四逆散对肝纤维化大鼠肝组织 miRNA-146a表达的影响

陕西中医２０１５年第３６卷第３期　３７ｌ　加昧四逆散对肝纤维化大鼠肝组织ｍｉＲＮＡ一１４６ａ表达的影响　晁　旭△董昌虎△李　宏△任清维▲郑旭锐王国全陕西中医学院（成阳７１２０４６）　摘　要　目的：检测加味四逆散对肝纤维化大鼠肝组织的病理和ｍｉＲＮＡ一１４６ａ表达的影响。方法：加　味四逆散治疗二甲基亚硝胺（ＤＭＮ）诱导的肝纤维化大鼠后，通过ＨＥ染色观察治疗前后　肝组织病理变化，并通过ＲＴ—ＰＣＲ技术检测ｍｉＲＮＡ一１４６ａ的表达。结果：与模型组比较，加　味四逆散治疗组大鼠肝组织汇管区可见轻度炎症，纤维结缔组织增生程度较治疗前减轻，有　显著性差异（Ｐ≤０．０５）。治疗后的大鼠肝组织中ｍｉＲＮＡ一１４６ａ的表达明显升高。结论：加　味四逆散科通过调节ｍｉＲＮＡ－１４６ａ的表达实现对肝纤维化的逆转。　主题词　加味四逆散肝纤维化ｍｉＲＮＡ～１４６ａ表达　动物，实验　大鼠　【中图分类号１　Ｒ５６３【文章标识码】Ａ　ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００—７３６９．２０１５．０３．０５７　Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｍｉＲＮＡ－１　４　６ａ　ｊｎ　ｌｉｖｅｒ　ｔｉｓｓｕｅ　ｏｆ　ｈｅｐａｔｉｃ　ｆｉｂｒｏｓｉｓ　ｉｎ　ｒａｔｓ　ｔｒｅａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　Ｊｉａｗｅｉ　Ｓｉｎｉ　ｐｏｗｄｅｒ　Ｓｈａａｎｘｉ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（Ｘｉａｎｙａｎｇ　７１２０４６）　Ｃｈａｏ　Ｘｕ　Ｄｏｎｇ　Ｃｈａｎｇｈｕ　Ｌｉ　Ｈｏｎｇ　ｅｔ　ａｌ　ＡＢＳＴＲＡＣＴ　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ　ｏｆ　ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ　ｃｈａｎｇｅｓ　ａｎｄ　ｍｉＲＮＡ－１４６ａ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｉｎ　ｌｉｖｅｒ　ｔｉｓ—　ｓｕｅ　ｏｆ　Ｈｅｐａｔｉｃ　Ｆｉｂｒｏｓｉｓ　ｉｎ　Ｒａｔｓ　ｔｒｅａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　Ｊｉａｗｅｉ　Ｓｉｎｉ　ｐｏｗｄｅｒ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｈｅ　ｐａｔｈｏｌｏｇｙ　ｃｈａｎｇｅｓ　ｗｅｒｅ　ｏｂｓｅｒｖｅｄ　ｂｙ　ＨＥ　ｓｔａｉｎｉｎｇ　ａｎｄ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ　ｏｆ　ｍｉＲＮＡ－１４６ａ　ｉｎ　ｌｉｖｅｒ　ｔｉｓｓｕｅ　ｏｆ　ｈｅｐａｔｉｃ　ｆｉｂｒｏｓｉｓ　ｉｎ　ｒａｔｓ　ｔｒｅａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　Ｊｉａｗｅｉ　Ｓｉｎｉ　ｐｏｗｄｅｒ　ｗｅｒｅ　ｄｅ—　ｔｅｃｔｅｄ　ｂｙ　ＳＹＢＲ　Ｇｒｅｅｎ　ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　ｒｅｖｅｒｓｅ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ　ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ　ｃｈａｉｎ　ｒｅａｃｔｉｏｎ（ｑＲＴ—ＰＣＲ）ａｎａｌｙｓｉｓ．ＲｅｓｕＩｔｓ：Ｔｈｅｒｅ　ｗｅｒｅ　ｏｎｌｙ　ｍｉｌｄ　ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｐｏｒｔａ１　ａｒｅａ　ａｎｄ　ｅａｓｅ　ｏｆ　ｆｉｂｒｏｕｓ　ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｍｉＲＮＡ一１４６ａ　ｓｉｇｎｉｆｉ—　ｃａｎｔｌｙ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ　ｉｎ　ｌｉｖｅｒ　ｔｉｓｓｕｅ　ｏｆ　ｈｅｐａｔｉｃ　ｆｉｂｒｏｓｉｓ　ｒａｔｓ　ｔｒｅａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　Ｊｉａｗｅｉ　Ｓｉｎｉ　ｐｏｗｄｅｒ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｊｉａｗｅｉ　Ｓｉｎｉ　ｐｏｗｄｅｒ　ｃｏｕｌｄ　ｒｅｇｕｌａｔｅ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｍｉＲＮＡ一１４６ａ　ｔｏ　ｉｎｈｉｂｉｔ　ｈｅｐａｔｉｃ　ｆｉｂｒｏｓｉｓ．　ＫＥＹ　ＷｏＲＤＳ　Ｊｉａｗｅｉ　Ｓｉｎｉ　ｐｏｗｄｅｒ　Ｈｅｐａｔｉｃ　ｆｉｂｒｏｓｉｓ　ｍｉＲＮＡ一１４６ａ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　Ａｎｉｍａ１．ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ　Ｒａｔｓ　ＭｉｃｒｏＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）是一类长度为１８－２６ｎｔ非编码ＲＮＡ，　ｍｉＲ一１４６ａ表达的影响。　１材料与方法　１．１　药品及试剂　加昧四逆散由黄芪、　丹参、姜黄、桃仁、柴胡、甘草、白芍、枳壳八种中药材组成，组方　中各种药物的质量比为１０：１０：５：２．５：１．５：１：５：２．５。　所有药物均购自陕西中医学院附属医院中药房，并经本院中药　它可与靶基因３’端非编码区的特异序列结合，对靶基因进行转　录后水平负调控，进而影响细胞的多种生理和病理过程＿１’　。　研究表明，ｍｉＲＮＡ这一转录后水平的调控因子可通过调控细　胞增殖、凋亡、脂代谢／脂肪酸代谢等一系列相关通路在许多肝　脏疾病的发生发展过程中发挥重要作用　］。有关ｍｉＲＮＡ在肝　教研室鉴定。所有药物称量好后，加注射用水４００　ｍＬ，煎煮２Ｏ　ｍｉｎ后，取滤液２００　ｍＬ。再按上述操作重复煎煮１次。然后将　脏疾病的发生和治疗中的作用已经成为当前研究的热点。　ｍｉＲＮＡ一１４６ａ基因是位于人体５号染色体Ｌ０ｃ２８５６２８基　因的第二个外显子区，它作为免疫和炎症反应的负调控因子，　有助于自体免疫疾病的恢复，如系统性红斑狼疮，类风湿关节　两次煎煮的滤液混合，水浴蒸发至浓度为３．５　ｇ／ｍＬ。秋水仙　碱、ＴＲＩｚｏｌ　Ｒｅｇｅｎｔ购自美国Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司、ｑＲＴ—ＰＣＲ逆转录　聚合酶链式反应试剂盒购自大连宝生物工程有限公司、二甲基　亚硝胺购自Ｓｉｇｍａ—Ａｌｄｒｉｃｈ（中国）公司、引物由生工生物工程　炎等　。ｍｉＲＮＡ一１４６ａ可以通过激活Ｓｍａｄ４调控ＴＧＦ—ｔ７１诱　导的肝星状细胞，进而导致肝纤维化　］。　加味四逆散是临床上用于治疗慢性病毒性肝炎的中药复　方，具有良好的防治肝纤维化作用ｌ＿７　］。但是，加味四逆散对肝　纤维化大鼠肝组织中ｍｉＲ一１４６ａ表达的影响及其生理意义尚未　见文献报道。本研究以二甲基亚硝胺（ＤＭＮ）诱导的肝纤维化　（上海）股份有限公司合成。　ｌ＿２肝纤维化大鼠制备　６Ｏ只清洁级ＳＤ大鼠（体重为　１８０±２Ｏ　ｇ，购自西安交通大学医学院实验动物中心）适应性饲　养１周后，随机分为６组，每组１Ｏ只。分别为空白对照组、模型　对照组、加味四逆散大剂量组、加味四逆散中剂量组、加味四逆　散小剂量组和秋水仙碱组。除空白对照组外，其余各组动物均　以１Ｏ　ｍＬ・ｋｇ。体重的剂量灌胃ＤＭＮ（５　ｇ・Ｌ－　），每日１次，　每周连续３ｄ，连续灌服４周。　大鼠为材料，采用逆转录聚合酶链式反应技术，检测加味四逆　散治疗前后肝组织中ｍｉＲＮＡ一１４６ａ的表达，探讨加味四逆散对　＊成阳市科学技术研究计划项目（２０１４ｋ０４—０２）　△陕西中医学院第二附属医院（咸阳７１２Ｏ０Ｏ）　１．３给药空白对照组和模型对照组均以４　ｍＬ・ｋｇ。　体重的剂量进行生理盐水灌胃；秋水仙碱组以０．０１　ｍｇ・ｋｇ。　▲陕西省周至县人民医院（周至７１０４００）　体重的剂量进行灌胃给药；加味四逆散小剂量组、中剂量组和　大剂量组分别以５　ｍＬ・ｋｇ　。、１０　ｍＬ・ｋｇ　和１５　ｍＬ・ｋｇ。体重　３７２　的剂量灌胃加味四逆散煎煮液。以上各组用药均１次／ｄ，连续　给药３０　ｄ。　１．４病理标本制作给药结束后，处死动物，取部分新鲜　的肝组织用生理盐水冲洗后，１Ｏ　的甲醛固定，然后进行石蜡　包埋，最后进行ＨＥ染色。按照病理组织学分级标准ｌ１¨分析　治疗前后肝组织纤维化程度。　１．５　ｍｉＲＮＡ一１４６ａ表达分析　取各组实验动物新鲜肝组　织，用ＴＲｈｏｌ试剂提取总ＲＮＡ，经逆转录反应得到ｃＤＮＡ。将　逆转录得到的ｃＤＮＡ分别按１、１０、１００和１　０００的倍数稀释，然　后在ＡＢＩ　７３００　Ｒｅａｌ—ｔｉｍｅＰＣＲ仪（Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）进行　ＰＣＲ。ｍｉＲＮＡ一１４６ａ引物为５　ＴＧＡＧＡＡＣＴＧＡＡＴＴＣＣＡＴ—　ＧＧＧＴＴ一３　，下游引物为５　ＡＴＣＴＡＣＴＣＴＣＴＣＣＡＧＧＴＣＣＴＣＡ　３　），内参基因Ｕ６　ｓｍａｌｌ　ｎｕｃｌｅａｒ　ＲＮＡ（ｓｎＲＮＡ）的上游引物为５　ＣＴＣＧＣＴＴＣＧＧＣＡＧＣＡＣＡ一３　，下游引物为５　ＡＡＣＧＣＴ—　ＴｃＡＣＧＡＡＴＴＴＧｃＧＴ一３　）。反应完后，计算各组样品中ｍｉＲ—　ＮＡ一１４６ａ和Ｕ６ｓｎＲＮＡ的平均Ｃｔ值，然后用Ｕ６　ｓｎＲＮＡ对模　型组和治疗组样品中ｍｉＲＮＡ一１４６ａ的Ｃｔ值进行校正，得出个　实验组的ＡＣｔ，再进行归一化处理，得到ＡＡＣｔ，最后用相对定量　法（ＲＱ一２一　。）计算ｍｉＲＮＡ一１４６ａ基因表达的差异。　１．６统计学方法采用ＳＰＳＳ１７．０软件进行数据处理，组　间比较采用ｔ检验，Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。　２结果２．ｉ　大鼠症状表现　给药期间，空白组大鼠　皮毛光滑，大便及饮食饮水量正常。模型对照组动物皮毛凌乱　无光泽，饮食饮水量明显减少、反应迟钝、粪便稀薄。秋水仙碱　治疗组动物治疗３周后，进食、摄水量正常，大便正常，精神状　态好转。加味四逆散小剂量治疗组与空白对照组动物相比较，　生活状态无明显区别。而加味四逆散中剂量治疗组和大剂量　治疗组动物３周后，进食、摄水量和大便趋于正常，生活状态比　治疗前显著改善。　２．２　组织病理学分析结果ＨＥ染色结果显示，模型组动　物肝组织汇管区及小叶内有中度炎性细胞浸润；大量胶原沉积　于汇管区，呈较宽的条索状纤维深入肝小叶。加味四逆散小剂　量治疗组与模型组动物肝组织结构无显著差异。而与模型组　比较，秋水仙碱治疗组、加味四逆散中剂量治疗组和大剂量治　疗组大鼠仅在汇管区可见轻度炎症，纤维结缔组织增生程度较　治疗前明显减轻。该结果证实了加味四逆散组对肝纤维化良　好的治疗作用。　表ｌ　各组大鼠肝脏组织纤维化分级　２．３肝组织中ｍｉＲＮＡ一１４６ａ的表达　肝组织中ｍｉＲＮＡ　陕西中医２０１５年第３６卷第３期　１４６ａ的表达结果显示，相对于空白对照组，二甲基亚硝胺（　ＤＭＮ）诱导的肝纤维化大鼠肝组织中ｍｉＲＮＡ一１４６ａ的表达显　著降低（Ｐ＜０．０５）。秋水仙碱治疗组、加味四逆散中剂量治疗　组和大剂量治疗组大鼠肝组织中ｍｉＲＮＡ一１４６ａ的表达明显升　高，与空白对照组无统计学差异，见图１。　表达　３讨论近年来，随着遗传学及肝纤维化机制研究的　深入，ｍｉｃｒｏＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）在肝纤维化进程中的作用逐渐被重　视。Ｍｉｃｒｏａｒｒｙ分析结果显示，相对于静息状态的肝星状细胞　（ＨＳＣｓ），被ＴＧＦ一８１激活的ＨＳＣｓ中ｍｉＲ　１４６ａ的表达显著地下　调＿１　。进一步研究显示，ｍｉＲＮＡ一１４６ａ以Ｓｍａｄ４为作用靶点，　通过ＴＧＦ一１３１／Ｓｍａｄｓ信号通路抑制ＴＧＦ－１３１诱导的肝星状细胞　增殖；其机制是ｍｉＲ　１４６ａ可以Ｓｍａｄ４　ｍＲＮＡ的３　端的非编码　区结合，从而使Ｓｍａｄ４基因翻译失活¨　。　。　加味四逆散是在临床上用于治疗肝纤维化疗效确切的中　药方剂，具有防止肝纤维化形成、阻断肝纤化发展、逆转肝纤维　化进程等显著效果。本研究结果显示，相对于空白对照组，二　甲基亚硝胺（ＤＭＮ）诱导的肝纤维化大鼠肝组织中ｍｉＲＮＡ一　１４６ａ的表达显著降低（Ｐ＜０．０５）；而秋水仙碱治疗组、加味四逆　散中剂量治疗组和大剂量治疗组大鼠肝组织中ｍｉＲＮＡ　１４６ａ　的表达明显升高。该结果提示我们，加味四逆散通过调节ｍｉＲ—　ＮＡ一１４６ａ的表达，实现对肝纤维化的逆转。但其具体机制，还　需进一步研究。　参考文献　［１］Ｌｙｔｌｅ，Ｊ．Ｒ．，Ｔ．Ａ．Ｙａｒｉｏ　ａｎｄ　Ｊ．Ａ．Ｓｔｅｉｔｚ，Ｔａｒｇｅｔ　ｍＲＮＡｓ　ａｒｅ　ｒｅｐｒｅｓｓｅｄ　ａｓ　ｅｆｆｉｃｉｅｎｔｌｙ　ｂｙ　ｍｉｃｒｏＲＮＡ—ｂｉｎｄｉｎｇ　ｓｉｔｅｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　５　ｕＴＲ　ａｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　３　ＵＴＲ［Ｊ］．Ｐｒｏｃ　Ｎａｔ　Ａｃａｄ　Ｓｃｉ　Ｕ　Ｓ　Ａ。　２００７，１０４（２３）：９６６７－９６７２．　Ｅ２２　Ｂｕｓｈａｔｉ　Ｎ．ａｎｄ　Ｃｏｈｅｎ　Ｓ．Ｍ，ｍｉｃｒｏＲＮＡ　ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ．　Ａｎｎｕ　Ｒｅｖ　Ｃｅｌｌ　Ｄｅｖ　Ｂｉｏｌ，２００７，２３：１７５－２０５．　［３］Ｈａｙｂａｅｃｋ　Ｊ，Ｚｅｌｌｅｒ　Ｎ　ａｎｄ　Ｈｅｉｋｅｎｗａｌｄｅｒ　Ｍ．Ｔｈｅ　ｐａｒａｌｌｅｌ　ｕｎｉｖｅｒｓｅ：ｍｉｃｒｏｇｒａｍｓ　ａｎｄ　ｔｈｅｉｒ　ｒｏｌｅ　ｉｎ　ｃｈｒｏｎｉｃ　ｈｅｐａｔｉ—　ｔｉｓ，ｌｉｖｅｒ　ｔｉｓｓｕｅ　ｄａｍａｇｅ　ａｎｄ　ｈｅｐａｔｏ　ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ［Ｊ］．Ｓｗｉｓｓ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｗｅｅｋｌｙ，２０１１，１４１：１３２８７—１３２９２．　Ｅ４］　Ｃａｍｅｒｏｎ　ＪＥ，Ｙｉｎ　Ｑ，Ｆｅｗｅｌｌ　Ｃ，ｅｔ　ａ１．Ｅｐｓｔｅｉｎ　Ｂａｒｒ　ｖｉ—　ｒｕｓ　ｌａｔｅｎｔ　ｍｅｍｂｒａｎｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ　１　ｉｎｄｕｃｅｓ　ｃｅｌｌｕｌａｒ　ＭｉｃｒｏＲＮＡ　ｍｉＲ一　１４６ａ，ａ　ｍｏｄｕｌａｔｏｒ　ｏｆ　ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ　ｓｉｇｎａｌｉｎｇ　ｐａｔｈｗａｙｓ［Ｊ］．Ｖｉｒｏｌ，　２００８，８２（４）：１９４６—１９５８．　［５］Ｐａｉｋ　ＪＨ，Ｊａｎｇ　ＪＹ，Ｊｅｏｎ　ＹＫ，ｅｔ　ａ１．ＭｉｃｒｏＲＮＡ一１４６ａ　陕西中医２０１５年第３６卷第３期　３７３　ｄｏｗｎ　ｒｅｇｕｌａｔｅｓ　ＮＦ—‘Ｂ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｖｉａ　ｔａｒｇｅｔｉｎｇ　ＴＲＡＦ６　ａｎｄ　ｆｕｎｃ—－　［１ｏ］　中华医学会传染病寄生虫病学分会、肝病学分会．　ｔｉｏｎｓ　ａｓ　ａ　ｔｕｍｏｒ　ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ　ｈａｖｉｎｇ　ｓｔｒｏｎｇ　ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ　ｉｍｐｌｉｃａ—　病毒性肝炎防治方案Ｅｃ］．２０００年９月西安会议．　ｔｉｏｎｓ　ｉｎ　ＮＫ／Ｔ　ｃｅｌｌ　ｌｙｍｐｈｏｍａ　ＥＪ］．Ｃｌｉｎ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ，２０１１，１７　［１】］Ｌｕｏ　Ｘ，Ｙａｎｇ　Ｗ，Ｙｅ　ＤＱ，Ｃｕｉ　Ｈ，Ｚｈａｎｇ　Ｙ，　（１４）：４７６１—４７７１．　Ｈｉｒａｎｋａｒｎ　Ｎ，Ｑｉａｎ　Ｘ，Ｔａｎｇ　Ｙ，Ｌａｕ　ＹＬ，ｄｅ　Ｖｒｉｅｓ　Ｎ，Ｔａｋ　ＰＰ，　［６］Ｐａｕｌｅｙ　ＫＭ，Ｃｈａ　Ｓ．ｍｉＲＮＡ－１４６ａ　ｉｎ　ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ　ａｒ—　Ｔｓａｏ　ＢＰ，Ｓｈｅｎ　Ｎ．Ａ　ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ　ｖａｒｉａｎｔ　ｉｎ　ｍｉｃｒｏＲＮＡ一１４６ａ　ｐｒｏ—　ｔｈｒｉｔｉｓ：ａ　ｎｅｗ　ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ　ｓｔｒａｔｅｇｙ［Ｊ］．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ，２０　１　１，３　ｏｒｏｔｅｒ　ｍｏｄｕｌａｔｅｓ　ｉｔｓ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ａｎｄ　ｃｏｎｆｅｒｓ　ｄｉｓｅａｓｅ　ｒｉｓｋ　ｆｏｒ　ｓｙｓ—　（７）：８２９－８３１．　ｔｅｍｉｃ　ｌｕｐｕｓ　ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ［Ｊ］．ＰＬｏＳ　Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，２０１１，７：　［７３　孙守才，刘光炜．加昧四逆散治疗慢性乙型肝炎肝纤　ｅｌ００２１２８．　维化的初步研究ＥＪ］．陕西中医学院学报，２００１，２４（１）：４６—４８．　［１２］Ｘｕ　ＷＤ，Ｌｕ　ＭＭ，Ｐａｎ　ＨＦ，Ｙｅ　ＤＱ．Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｅ８］　孙守才，李晓苗，曾福海，等．加味四逆散防治大鼠免　ＭｉｃｒｏＲＮＡ一１４６ａ　ｗｉｔｈ　ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ　ｄｉｓｅａｓｅｓ［Ｊ］．Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ　疫性肝纤维化的实验研究［Ｊ］．陕西中医学院学报，２００２，２５８　２０１２，３５（４）：１５２５—１５２９．　（２）：３２—３５．　［１３］Ｈｅ　Ｙ，Ｈｕａｎｇ　Ｃ，Ｓｕｎ　Ｘ，Ｌｏｎｇ　ＸＲ，Ｌｖ　ＸＷ，Ｌｉ　Ｊ．　［９］　孙守才，刘光炜，曾福海，等．加味四逆散对肝纤维化　ＭｉｃｒｏＲＮＡ——１４６ａ　ｍｏｄｕｌａｔｅｓ　ＴＧＦ－ｂｅｔａｌ——ｉｎｄｕｃｅｄ　ｈｅｐａｔｉｃ　ｓａｔｅｌｌｉｔｅ　大鼠血清透明质酸、层粘连蛋白、Ⅳ型胶原及肝脏超微结构的　ｃｅｌｌ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｂｙ　ｔａｒｇｅｔｉｎｇ　ＳＭＡＤ４．２０１２，１０：１９２３—３Ｏ．　影响［Ｊ］．中国中医基础医学杂志，２００２，８（１１）：５６．　（收稿２０１４—０６—１１；修回２０１４—０７－２５）　地黄饮子含药血清对海马脑片ＳＤＦ一１的影响　王　倩△　范文涛△　贺又舜　湖南中医药大学（长沙４１０２０８）　摘　要　目的：探讨地黄饮子对大鼠海马脑片ＳＤＦ一１蛋白的影响。方法：ＳＤ大鼠１８只，用乙醚麻醉　大鼠，分离海马组织，培养２周后，分为对照组（ＨＯＴＣ组）和低氧缺糖组（ＯＧＤ组）。采用　地黄饮子含药血清培养海马脑片，观察地黄饮子含药血清对海马脑片ＳＤＦ－１的影响。结　果：研究发现用地黄饮子含药血清培养大鼠脑片，能明显提高缺血、缺氧组脑片ＳＤＦ一１蛋　白、ＣＸＣＲ４含量，与对照组比较具有显著差异，说明地黄饮子能促进缺血区ｓＤＦ一１的表达，　进一步促进低氧低糖区脑组织神经再生能力。结论：地黄饮子含药血清能有效提高缺血缺　氧区脑片ＳＤＦ一１含量，进一步改善脑组织缺血缺氧能力，通过ＳＤＦ一１／ＣＸＣＲ４信号通路促进　脑组织神经再生能力。　主题词　＠地黄饮子　动物，实验　大鼠　【中图分类号】Ｒ５６３【文章标识码】Ａ　ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００—７３６９．２０１５．０３．０５８　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　Ｄｉｈｕａｎｇ　Ｙｉｎｚｉ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｏｎ　ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ　ｓｌｉｃｅｓ　ｏｆ　ＳＤＦ＿１　ｉｎ　ｒａｔｓ　Ｈｕｎａｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（Ｃｈａｎｇｓｈａ　４１０２０８）　Ｗａｎｇ　Ｑｆａｎ　Ｆａｎ　Ｗｅｎｔａｏ　Ｈｅ　Ｙｏｕｓｈｕｎ　ＡＢＳＴＲＡＣＴ　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　Ｄｉｈｕａｎｇ　Ｙｉｎｚｉ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｉｎ　ｒａｔ　ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ　ｓｌｉｃｅｓ　ｏｆ　ＳＤＦ－１．Ｍｅｔｈｏｄｓ：１８　ＳＤ　ｒａｔｓ，　ｒａｔｓ　ｗｉｔｈ　ｅｔｈｅｒ　ａｎｅｓｔｈｅｓｉａ，ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ，ｔｒａｉｎｉｎｇ　２　ｗｅｅｋｓ　ｌａｔｅｒ，ｄｉｖｉｄｅｄ　ｉｎｔｏ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ（ｇｒｏｕｐ　Ｈ０ＴＣ）ａｎｄ　ｌｏｗ　ｏｘｙｇｅｎ　ｌａｃｋ　ｏｆ　ｓｕｇａｒ　ｇｒｏｕｐ（ＯＧＤ　ｇｒｏｕｐ）．Ｕｓｉｎｇ　Ｄｉｈｕａｎｇ　Ｙｉｎｚｉ　ｄｒｕｇ—ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ　ｓｅｒｕｍ　ｃｕｌｔｕｒｅｄ　ｈｉｐｐ—　ｏｃａｍｐａｌ　ｓｌｉｃｅｓ，ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｄｉｈｕａｎｇ　Ｙｉｎｚｉ　ｄｒｕｇ—ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ　ｓｅｒｕｍ　ａｆｆｅｃｔ　ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ　ｓｌｉｃｅｓ　ｏｆ　ＳＤＦ－１．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅ　ｓｔｕｄｙ　ｆｏｕｎｄ　ｔｈａｔ　ｗｉｔｈ　Ｄｉｈｕａｎｇ　Ｙｉｎｚｉ　ｄｒｕｇ—ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ　ｓｅｒｕｍ　ｔｒａｉｎｉｎｇ　ｒａｔｓ，ｃａｎ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｉｍｐｒｏｖｅ　ｔｈｅ　ｉｓｃｈｅｍｉａ　ａｎｄ　ｈｙ—　ｐｏｘｉａ　ｏｆ　ｂｒａｉｎ　ｓｌｉｃｅ　ｏｆ　ＳＤＦ一１　ａｎｄ　ＣＸＣＲ４　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｃｏｎｔｅｎｔ，ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ　ｗｉｔｈ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ，Ｄｉ—　ｈｕａｎｇ　Ｙｉｎｚｉ　ｃａｎ　ｐｒｏｍｏｔｅ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｉｓｃｈｅｍｉａ　ａｒｅａ　ＳＤＦ－１，ｔｏ　ｆｕｒｔｈｅｒ　ｐｒｏｍｏｔｅ　ｔｈｅ　ｌｏｗ　ｏｘｙｇｅｎ　ｓｕｇａｒ　ａｒｅａ　ｂｒａｉｎ　ｎｅｒｖｅ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ａｂｉｌｉｔｙ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＤｉＨｕａｎｇ　ＹｉｎＺｉ　ｍｅｄｉｃａｔｅｄ　ｓｅｒｕｍ　ｃａｎ　ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙ　ｉｍｐｒｏｖｅ　ｔｈｅ　ｉｓｃｈｅｍｉａ　ａｎｏｘｉｃ　ｚｏｎｅ　ｓｌｉｃｅｓ　ＳＤＦ－１　ｃｏｎｔｅｎｔ　ａｎｄ　ｆｕｒｔｈｅｒ　ｉｍｐｒｏｖｅ　ｔｈｅ　ｃｅｒｅｂｒａ１　ｉｓｃｈｅｍｉｃ　ａｎｏｘｉａ　ａｂｉｌｉｔｙ，ｔｈｒｏｕｇｈ　ｔｈｅ　ＳＤＦ一１／ＣＸＣＲ４　ｓｉｇｎａｌｉｎｇ　ｐａｔｈｗａｙ　ｔｏ　ｐｒｏｍｏｔｅ　ｂｒａｉｎ　ｎｅｒｖｅ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．　ＫＥＹ　ＷｏＲＤＳ　＠Ｄｉｈｕａｎｇ　Ｙｉｎｚｉ　Ａｎｉｍａｌ，ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ　Ｒａｔｓ　在正常情况下的神经干细胞处在休眠状态，只有在一定的　＊陕西省科技厅资助项目（２０１２ｋ１９—０５—０４）　信号条件下才可以被激活。脑缺血时，海马、侧脑室室管膜下　△陕西中医学院（咸阳７１２０４６）　区以及脑皮层可增殖的神经于细胞被炎症刺激激活，进一步迁