活化部分凝血活酶时间APTT测定作业指导书

活化部分凝血活酶时间APTT测定作业指导书

1. 实验原理：

于37℃下在贫血小板血浆（PPP）中，加入激活剂，激活FXⅡ和FXⅠ，以脑磷脂替代血小板提供凝血的催化表面，在Ca离子的参与下，观察血浆凝固所需时间，即为待测血浆活化部分凝血活酶时间（APTT）。

2. 标本采集：

2.1 早晨空腹采血(空腹12小时左右)，静脉采血。

2.2 3.8％(w/v)枸椽酸钠0.2ml+静脉血1.8ml，混匀。

3. 标本存放：1小时内(3000r/min×10min)分离血浆，室温放置不超过2小时，2～8℃保存不超过4小时，长时间保存需在冰冻条件下，（-70℃不超过6个月），只能冻融1次，在37℃迅速解冻，以减低凝血因子的消耗，解冻后立即测试。

4. 标本运输：低温条件下运输。

5. 标本拒收的标准：抗凝剂不符合，采血量不准确，凝固，溶血，脂血标本不能作该项目检测。

6. 实验材料：

北京世帝科学仪器公司活化部分凝血酶原时间测定试剂盒，主要成分由APTT试剂和氯化钙溶液组成，APTT试剂的主要成分为鞣花酸和脑磷脂。

7. 仪器设备：

7.1 仪器名称：M200全自动凝血因子分析仪。

7.2 仪器厂家：北京世帝科学仪器有限责任公司。

7.3 仪器型号：Coagulation analyzer M200

7.4 仪器技术参数：

7.4.1 试剂位：16个，可放置不同规格大小的试剂瓶。

7.4.2 样品位：60个，可放置原试管。

7.5 仪器校准程序：

7.5.1 校准频率：当方法改变，试剂厂家或试剂型号改变，仪器维修影响测定结果等情况时，必须进行校准。

7.5.2 校准操作：设置标准曲线分析(由仪器提供商指定工程师执行)。

8. 操作步骤：

8.1 开机前应先检查清洗液、废液、测试杯、试剂量是否足够。

8.2 打开血凝仪电源开关，打开电脑双击图标，输入密码。

8.3 试剂按照图形显示的位置摆放。

8.4 联机完成后，预温10-15min。

8.5 点击“输入”选择“项目”再选择单孔或批量，完毕后点击“新增”后，再点击退出。

8.6 点击主菜单“下发任务”（在不关软件的情况下只是第一次需要此操作）。

8.7 回到主菜单切换到“列表显示”编辑病人信息，点击保存。

8.8 测试完毕后，（如有异常曲线、异常值时可选中重测）然后选择打印。

9. 检验结果的判断与分析：

9.1仪器测定APTT的线性范围在5-600秒，若不能测出结果，将出现下列信息：

“- - -”提示检测失败，可能的原因是：试剂缺乏。

9.2仪器设定APTT参考范围在24-35秒，如果得不到一个正常数值，需要重新测定。

10. 质量控制：每批样本同时测定两个浓度水平(高值和正常值)的质控品，以2S为警

告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则详见室内质控作业指导书。

11. 临床意义： APTT常用于内源性凝血系统（Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ、Ⅻ因子）的筛选及肝素抗凝治疗的监测。

11.1参考范围：24-35秒（患者结果超过正常对照10秒以上为异常）

11.2 APTT延长：见过先天性凝血因子缺乏（如血友病甲、乙，接触因子Ⅻ、Ⅺ缺乏、VWF等）；多种凝血因子缺乏（如严重肝病、维生素K缺乏、DIC、纤溶亢进等）；血液中有抗凝物质存在。

11.3 APTT缩短：见于DIC高凝期和妊娠高血压综合症等高凝状态。

11.4 是监测肝素治疗的首选指标。

12. 变异的潜在原因：

12.1 抗凝剂：草酸盐、EDTA、肝素不适用于PT检查。

12.2 标本采集处理不当，如血与抗凝剂未充分混匀，出现凝块，混匀时过分用力使标本溶血，造成结果变异。

12.3 纤溶药物的影响（如双香豆素、链激酶、尿酶等），超剂量使用肝素。

12.4 FDP增加使凝固时间延长。

12.5 某些药物的影响（如口服避孕药、雌激素、天门冬酰胺酶、钠络酮等）。

13. 操作注意事项：

13.1 在采集全血和整个测试过程中，所有试管、注射器以及移液管都应为塑料制品。

13.2 不同批号的试剂盒各组分不能混合使用。

13.3 待测血浆不能采用肝素、EDTA抗凝，应使用109mmol/L枸橼酸钠抗凝。

13.4 为防止在测定过程中V、Ⅷ因子的损失，预温时间要准确为180秒，预温温度应保持在36.5℃-37.5℃。

13.5 如果血球压积＜20%或＞55%，需按下列公式调整血样与抗凝剂的比例：抗凝剂用量=0.00185×血量（ml）×（100-病人红细胞压积）。

13.6 Cacl2溶液在37℃预温区，极易蒸发导致其浓度变化而使测试不准，故预温及使用后应及时加盖防止蒸发。

13.7 当Cacl2溶液变浑浊时提示该试剂已经变质。

13.8溶血标本不得使用，必须重新采样。

14. 仪器维护与保养：

14.1 试剂、比色杯及时添加。

14.2 日维护：每日关机前点击“针浸泡”1次。

15. 参考文献：

15.1 叶应妩，王毓三，申子瑜。《全国临床检验操作规程》。中华人民共和国卫生部医政司，2006.

15.2 丛玉隆，王淑娟，《今日临床检验学》，中国科学技术出版社。

15.3 王鸿利，《血液学和血液学检验》，人民卫生出版社。

15.4 李家增等，《血栓与止血基础理论与临床》，上海科学技术出版社。