常用染料的激发与发射

Fluorescent Dye （荧光染料） Excitation （激发波Emission （发射长， nm ） 489 波长， nm ） 506 Cy2 ? GFP(Red Shifted) 488 507 YO-PRO ? -1 491 509 YOYO ?-1 491 509 Calcein 494 517 FITC 494 518 FluorX 494 519 Alexa ? 488 490 520 Rhodamine 110 496 520 ABI,5-FAM 494 522 Oregon Green ?500 503 522 Oregon Green ? 488 496 524 RlboGreen ? 500 525 Rhodamine Green ? 502 527 Rhodamine123 507 529 Magnesium Green ? 506 531 Calcium Green ? 506 533 TO-PRO ?-1 514 533 TOTO-1 514 533 ABI,JOE 520 548 BODIPY? 530/550 530 550 Dil 549 565 BODIPY?R 542 568 BODIPY?558/568 558 568 BODIPY?564/570 564 570 Cy3 ? 550 570 Alexa ? 546 555 570 TRITC 547 572 Magnesium Orange ? 550 575 Phycoerythrin,R & B 565 575 Rhodamine Phalloidin 550 575 Calcium Orange ? 549 576 Pyronin Y 555 580 Rhodamine B 555 580 ABI,TAMRA 560 582 Rhodamine Red ? 570 590 Cy3.5 ? 581 596 ABI,ROX 588 608 Calcium Crimson ? 590 615 Alexa ? 594 590 615 Texas Red 595 615 Nile Red 549 628 YO-PRO ? -3 612 631 YOYO ? -3 612 631 R-Phycocyanin 618 642 C-Phycocyanin 620 648 TO-PRO ? -3 642 660 TOTO-3 642 660 DiD DilC’(5) 644 665 Cy5 ? 649 670 Thiadicarbocyanine 651 671 Cy5.5 675 694 备注：发射波长的颜色及频率

颜色 波长 频率 红色 约625—740纳米 约480—405兆赫 橙色 约590—625纳米 约510—480兆赫 黄色 约565—570纳米 约530—510兆赫 绿色 约500—565纳米 约600—530兆赫 青色 约485—500纳米 约620—600兆赫 蓝色 约440—485纳米 约680—620兆赫 紫色 约380—440纳米 约790—680兆赫

荧光染料的使用

吖啶橙：吖啶橙是最经典的灵敏的荧光染料，它可对细胞中的DNA和RNA同时染色而显示不同颜色的荧光，DNA呈绿色荧光，RNA呈橙红色荧光。EB:染色DNA和RNA荧光素双醋酸酯(FDA)：FAD?本身无荧光,无极性,可透过完整的原生质膜。一旦进入原生质体后,由于受到酯酶分解而产生具有荧光的极性物质荧光素。它不能自由出入原生质膜，因此有活力的细胞能产生荧光,无活力的原生质体不能分解FAD无荧光产生。5mgFDA溶于1ml丙酮中,避光4℃下贮存,使用时取0.22mlFDA贮存液加入5ml0.65mol/L甘露醇中.使用时,使最终浓度为0.01%。荧光染料Ho33342和若丹明123:?活细胞双荧光染色观察细胞核和线粒体。一般的生物染料不能穿透细胞膜，只有当细胞被固定后改变了细胞膜的通透性，染料才能进入细胞内。但有些活体染料能进入活细胞，并对细胞不产生毒性作用。荧光染料Ho33342和若丹明123都是活体染料。Ho33342能与细胞中DNA进行特异的结合，若丹明123能与线粒体进行特异的结合。采用两种荧光染料的混合染液可对一个活细胞的核和线粒体同时染色。

荧光组化实验中应注意的几个问题：1．每种荧光染料，均有自己的最适PH值，此时荧光最强。当pH改变时，不仅荧光强度减弱，而且波长将有所改变，因此荧光检测时要在一定的PH值的缓冲液中进行。2．一放荧光染色在20℃以下时荧光比较稳定，温度升高常出现温度猝灭。3．在荧光观察中，常因激发光的增强而使样品荧光很快衰竭，造成观察和照相困难。为此最好用能量小的长波长光进行观察，需照相时再适当增强激发光。4．一般荧光染液的浓度在万分之一以下，甚至亿万分之一，也能使标本着色。在一定的限度内，荧光强度可随荧光素的浓度增加而增强，但超过限度，荧光强度反而下降，

这是由于荧光分子间的缔合而使自身荧光猝灭所致。