洁净室空气的尘埃粒子检验

洁净室空气的尘埃粒子检验-新版GMP环境监测解读（一） 微粒，特别是尘粒的存在直接影响药品质量，危及人们的生命安全。大量临床资料表明，如药品被～2um的尘粒污染，尤其是静脉注射用药，可以导致热源反应、肺动脉炎、微血栓或异物肉芽肿等，严重的会致人死命。粒子进入血管系统对人体的危害，与粒子数量、粒径及理化性质有关。另外，微生物的污染是生产环境最重要的因素，它与最终的产品微生物负载控制相关。研究表明，单一微生物本身并不能独立存活在空气当中，他们要么以菌团形式存在，要么必须附着于无活性的尘埃粒子(尤其是直径大于μm的粒子)之上。这也就将空气中微生物水平同尘埃粒子水平联系在了一起。洁净室的各种硬件系统控制了空气中悬浮粒子的数目，从而也就降低了空气中微生物的污染。因此GMP规定应对洁净区的尘埃粒子进行有效的监测。 空气洁净度是指洁净环境中空气含尘（微粒）多少的程度。含尘浓度高则洁净度低，含尘浓度低则洁净度高。新版GMP将无菌药品生产所需的洁净区分为4个级别，生产企业不仅要对洁净室的级别进行确认，还要对洁净区进行监测。尘埃粒子测试状态有静态和动态两种，静态测试是在空气净化系统处于正常运行状态，工艺设备已安装，且洁净室内无生产操作人员情况下进行。动态测试是在洁净室处于正常生产状态下进行。 中国GMP对于各级别空气悬浮粒子的标准规定如下表： 洁净度级别 A级 B级 C级 D级 静态 悬浮粒子最大允许数/立方米 动态 ≥μm 3520 3520 352000 3520000 ≥μm 20 29 2900 29000 ≥μm 3520 352000 3520000 不作规定 ≥μm 20 2900 29000 不作规定 目前，用于洁净环境中空气尘埃粒子监测的仪器多为光散射粒子计数器，其工作原理是，当取样气流中的尘埃颗粒通过计数器散射腔的光敏感区时，光遇到粒子时发生散射，这些光脉冲信号经光电二极管转换成电脉冲信号，电脉冲次数反映粒子数，脉冲幅值反映粒子的粒径。一台仪器可同时测定多个粒径通道的粒子。

取样点和取样频率

洁净室空气的尘埃粒子检验-新版GMP环境监测解读（二）

尘埃粒子的采样点数目及其布置应根据产品的生产及工艺关键操作区设置，对于取样点的选择还要注意以下几点：

1、任何洁净区内不得少于两个取样点；

2、除受洁净区的设备限制外，取样点应在整个洁净区均匀布置；

3、全面进行风险分析评估，对污染风险高的区域应考虑增加取样点和取样次数，如可能与产品直接接触的空气和设备附近、人员活动频繁区域等。

4、在一个区域内应最少取样五次，每个取样点的取样次数应多于一次，而不同取样点的取样次数可以不同，并且每次取样量不得低于 升；为了确定A 级区的级别，每个采样点的采样量不得少于1 立方米。

5、在A级区域进行取样时，应尽量避免取样设备对环境的影响，可考虑使用远程采样系统，但其采样管不宜超过2米，避免较长的采样管中≥ 尘粒的沉降。

6、取样点一般布置在距离地面~ 米之间或操作平台的高度，即接近人手操作的高度。 7、尽量避免在回风口附近取样，而且测试人员应站在取样口的下风侧。 限度设定

可以根据历史数据，结合不同洁净区域的标准制订。对新厂房而言，可根据以前的类似设施或工艺来制定这些限度，并且要进行为期几周的环境监测，根据监测数据来评价事先确立的警戒限度是否合适，并做出相应调整。限度设定以后，应定期回顾评价，如每个季度或年度。如果历史性数据表明环境有所改善，则限度也应作相应调整以反映出实际的环境状况。 注意事项

1.严格按照仪器生产商要求操作和使用设备

2.事先确认洁净区通风系统运行平稳后，方可进行取样。

3.监测单项流时，将计数器取样口正向对着气流方向；监测紊流时，宜将取样口垂直朝上。在单向流系统中，应采用等动力学的取样头。

4.在确认级别时，应尽量使用采样管较短的便携式尘埃粒子计数器，以避免在远程采样系统长的采样管中≥ 尘粒的沉降。

5.监测系统的选择还应考虑生产操作中物料（例如有活的生物体或放射性药品的操作）带来的风险。

除了要求控制环境中的粒子水平外，我们还要注重洁净环境中的微生物水平。洁净室的各种硬件系统控制了空气中悬浮粒子的数目，从而也就降低了空气中微生物的污染。

GMP规定为评估无菌生产的微生物状况，应对微生物进行动态监测，监测方法有沉降菌法、定量空气浮游菌采样法和表面取样法（如：棉签擦拭法和接触碟法）等。

沉降菌法：用暴露法收集降落在培养皿中的活生物性粒子，然后加以培养、繁殖后加以计数得到。

定量空气浮游菌采样法：通过收集悬浮在空气中的生物性微粒，通过专门的培养基，在适应的生长条件下，让其繁殖到可见的菌落进行计数从而判定洁净环境中单位体积空气中菌落数的多少。

表面取样法：用来监测生产区域表面以及设备和与产品接触表面的微生物量。基本的监测方法包括：

1、接触碟法：适用于对平整的规则性表面进行取样监测， 2、擦拭法：用于对不规则表面（尤其是设备表面）进行取样

3、表面冲洗法：用于监测大面积区域内表面的微生物含菌量，包括设备轨道、储水罐等。用定量的无菌水冲洗表面，收集淋洗水，用膜过滤法来计算微生物数量。

洁净室微生物监测的限度要求

中国GMP规定：洁净区微生物监测的动态标准如下：

浮游菌 洁净度级别 A级 B级 C级 D级 ＜1 10 100 200 ＜1 5 50 100 cfu/m 3(1)

表面微生物 沉降菌（90mm） cfu /4小时 (2)接触（55mm） cfu /碟 ＜1 5 25 50 5指手套 cfu /手套 ＜1 5 --- --- 注：（1）表中各数值均为平均值。

（2）单个沉降碟的暴露时间可以少于4小时，同一位置可使用多个沉降碟连续进行监测并累积计数。

洁净室微生物监测取样点和取样频率 为了建立常规的取样位点，必须考虑产品与其接触或暴露环境的程度。对反映产品的微生物含菌量有代表性的取样点必须取样和进行环境监测。与产品接触的来源可能包括压缩气体，房间空气，生产设备，工具，关键表面，储存容器，传送带，手套、人员以及水。不与产品直接接触的来源可能包括：墙，地，天花板，门，长凳，椅子，测试仪器和缓冲间。建立常规的取样位点时还应考虑环境监测是否会增加产品的污染。建立一个合适的取样点需要考虑很多因素，比如厂方设施，生产线的设定，验证数据，生产过程，历史数据，测试方法等。洁净区（室）监测中的取样点和取样量可以比洁净级别确认时的取样点和取样量少，但应该通过正式的风险分析研究和对监测结果的分析（至少要有6 个月以上的运行数据作为分析基础）来确定监测频次和限度。同时，监测频次和限度的确定也要考虑到生产工艺因素，监测限度及取样点应该定期进行回顾验证，以保证监测行为的有效性。以下是国标GB/T 16292~16294-1896 “医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法中规定的最少取样点数。 洁净区空气悬浮粒子、浮游菌及沉降菌的最少取样点数 面积（m） 2洁净级别 100 10 000 2 2 2 4 10 20 40 100 000 2 2 2 2 3 6 13 ＜ 10 ≥10 ~ ＜20 ≥20 ~ ＜40 ≥40 ~ ＜100 ≥100 ~ ＜200 ≥200 ~ ＜400 ≥400 ~ ＜1000

2 ~ 3 4 8 16 40 80 160