传代培养培养实验

发布网友 发布时间：2024-09-27 04:02

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传代培养是组织培养中常用的保种手段，它是细胞生物学实验的基础步骤。在细胞生长满培养瓶后，需要将其稀释并分装到多个瓶子，以保持细胞的持续生长。这个过程被称为传代。通过严格的无菌操作，可以获取大量用于实验的细胞。

实验所需的材料和设备包括：培养瓶、试管、移液管、巴斯德吸管、废液缸、75%酒精棉球、酒精灯、C02培养箱、倒置显微镜、以及超净台等。药品则有培养基（如RPMI10或DMEM）、小牛血清或胎牛血清、0.25%胰蛋白酶和Hanks液等。

实验步骤如下：首先，进入无菌室前需彻底清洁双手；在倒置显微镜下观察细胞形态，确定传代时间和稀释倍数；准备好预热的培养用液。超净台需保持清洁，开启紫外灯消毒后，再开启抽风机清理空气。然后，点燃酒精灯，准备无菌工具，并消毒培养用液瓶口。接下来，倒掉旧培养基，用Hanks液清洗或胰酶处理细胞，使它们脱离瓶壁。添加新鲜含血清的培养基制成细胞悬液，分装到新培养瓶中，放入C02培养箱中。

注意事项包括：确保无菌操作，避免交叉污染；操作时靠近酒精灯火焰；一次只进行一种细胞的操作，使用专用器材；每天检查细胞健康状况，污染时需果断处理，必要时采取抗生素清洗措施。

传代培养中的细胞传代培养（subculture），当原代培养成功以后，随着培养时间的延长和细胞不断，一则细胞之间相互接触而发生接触性抑制，生长速度减慢甚至停止；另一方面也会因营养物不足和代谢物积累而不利于生长或发生中毒。此时就需要将培养物分割成小的部分，重新接种到另外的培养器皿（瓶）内，再进行培养。这个过程就称为传代（passage）或者再培养（subculture）。对单层培养而言，80%汇合或刚汇合的细胞是较理想的传代阶段。