免疫胶体金技术在免疫学中的应用

发布网友 发布时间：2024-10-23 16:39

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热心网友 时间：2024-11-09 06:46

胶体金标记技术因其简便、敏感、特异的标记物制备方法，在免疫学领域得到广泛应用，无需放射性同位素或潜在致癌物质的酶显色底物，也无需荧光显微镜。该技术的应用范围广泛，不仅限于光镜或电镜的免疫组化法，还广泛应用于液相免疫测定、金标记流式细胞术及胶体金固相免疫测定法等。

在液相免疫测定中，胶体金与抗体结合，建立微量凝集试验检测抗原，通过直接观察凝集颗粒的颜色变化进行检测。例如，通过均相溶胶颗粒免疫测定法（SPIA）成功应用于PCG的检测，并能直接进行定量分析。

金标记流式细胞术利用胶体金改变红色激光的散射角，适用于分析不同类型细胞的表面抗原。胶体金标记的细胞在波长632nm时，90度散射角可放大10倍以上，同时不影响细胞活性。与荧光素共同标记时，二者互不干扰。

胶体金固相免疫测定法有多种应用形式，如斑点免疫金银染色法（Dot－IGS/IGSS）和斑点金免疫渗滤测定法（DIGFA）。斑点免疫金染色法（Dot－IGS）将蛋白质抗原直接点样在纤维膜上，与特异性抗体反应后，滴加胶体金标记的第二抗体，形成肉眼可见的红色斑点。通过银显影液增强，即斑点金银染色法（Dot－IGS/IGSS）。

斑点金免疫渗滤测定法（DIGFA）与斑点免疫金染色法原理相同，区别在于纤维膜下垫有吸水性强的垫料，形成渗滤装置。在加抗原（抗体）后，迅速加抗体（抗原），再加金标记第二抗体，由于有渗滤装置，反应迅速，在数分钟内即可显出颜色反应。此方法已成功应用于HIV的检查和人血清中甲胎蛋白的检测。

免疫胶体金技术(Immune colloidal gold technique) 是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体的一种新型的免疫标记技术。胶体金是由氯金酸（HAuCl4）在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用下，聚合成为特定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态，称为胶体金。胶体金在弱碱环境下带负电荷，可与蛋白质分子的正电荷基团形成牢固的结合，由于这种结合是静电结合，所以不影响蛋白质的生物特性。 胶体金除了与蛋白质结合以外，还可以与许多其它生物大分子结合，如SPA、PHA、ConA等。根据胶体金的一些物理性状，如高电子密度、颗粒大小、形状及颜色反应，加上结合物的免疫和生物学特性，因而使胶体金广泛地应用于免疫学、组织学、病理学和细胞生物学等领域。