氨基氨基转移反应的定性鉴定
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发布时间：2024-10-24 14:59
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时间：2024-11-01 15:02
本文主要介绍了氨基转移反应的定性鉴定实验及其原理。实验目的在于学习一种鉴定氨基转移作用的简便方法，进一步掌握纸层析的原理和操作技术，并了解氨基转移作用在中间代谢中的意义。
氨基转移酶催化α-氨基酸的氨基与α-酮酸的α-酮基互换，这种作用称为氨基移换作用。它在生物体内蛋白质的合成与分解等中间代谢中，在糖、脂肪、蛋白质三类物质代谢的相互联系、相互转化上，都起着重要的作用。不同氨基酸进行转氨作用时，由其专一的转氨酶催化。这些酶的最适pH接近7.4。
实验所需试剂与器材包括解剖器具、离心机、恒温水浴、干燥箱、台秤、层析系统等。主要试剂有1/15mol/L磷酸缓冲液（pH=7.4）、1%谷氨酸溶液（用KOH中和至中性）、1%丙酮酸溶液（用KOH中和至中性）、0.1%碳酸氢钾溶液、0.05%碘乙酸溶液、15%三氯醋酸溶液、标准丙氨酸溶液(0.1%)、标准谷氨酸溶液(0.1%)、0.1%水合茚三酮乙醇溶液、酚溶剂。
操作方法包括取兔肝脏制备酶液，进行体外氨基移换反应，然后使用纸上层析法检查。具体步骤包括点样、加入饱和酚试剂、盖紧塞子并显色。关键步骤与注意事项包括取动物新鲜组织制备酶液，防止酶失活；加入碘乙酸抑制酶解作用。
本实验通过学习氨基转移反应的定性鉴定，有助于深入理解氨基酸代谢过程中的关键作用，为研究生物体内代谢途径提供基础。
