细胞转染攻略
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发布时间：2024-10-24 15:15
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时间：2024-11-10 01:59
在基因与蛋白功能研究中，转染技术是不可或缺的基本工具。它大致分为物理、化学和生物三种途径，每种方法各有其特点和适用范围。
首先，转染的分类是根据导入核酸在细胞内的持续时间和转染方式。根据DNA在细胞内的存留时间，可分为瞬时转染（快速释放）和稳定转染（长期表达）。按照转染手段，可分为化学转染（如使用脂质体）、生物转染（如病毒介导）和物理转染（如电穿孔法）。
在众多转染方法中，脂质体转染因其操作简便且无需额外仪器，成为实验室中的常见选择。我们接下来将深入探讨脂质体转染的原理和具体步骤。
脂质体转染是利用脂质膜包裹DNA，通过正负电荷相互吸引，使DNA-阳离子脂质体复合物吸附到细胞膜上，经内吞进入细胞。这种方法具有高效和重复性好的优点，适用于悬浮或贴壁培养细胞，并且是目前最便捷的转染方法之一。
进行脂质体转染前，需要做好充分准备，包括规划实验时间、计算所需的DNA和脂质体剂量，以及准备好Opti-MEM无血清培养基、Lipofectamine转染试剂等必需品。细胞一般选择生长稳定、传代3-4次的，转染当天将细胞铺板至适宜密度，一般为70-90%汇合率，然后进行清洗、更换无血清培养基、配置转染液并加入转染试剂。转染后，需及时更换培养基，观察转染效果并根据需要进行复转染或药物筛选。
